オハイオ州北西部の町、ライマにあるウィリアム・マッキンリー高校のグリークラブは廃部の危機を迎えていた。新任教師ウィル・シュースターは、自分が在籍していた当時の栄光を取り戻すべく、新生グリークラブ「ニュー・ディレクションズ!」の顧問となる。 各種マイノリティー揃いの部員たちは負け犬のレッテルを貼られ、校内ではいじめの対象だったが、ウィルや仲間たちと信頼を築きながら、地区大会や州大会を目指していく。

ニュー・ディレクションズ!のメンバー達は、相変わらず校内での人気を得られぬままだった。部員たちは新しく入部した仲間とともに数々のトラブルを乗り越えながら、地区大会や州大会、そして全国大会の開催されるニューヨークを目指していく。

卒業を間近に控えた最上級生メンバー達は、進路に悩みながらも下級生たちと力をあわせ、悲願となるニュー・ディレクションズ!全国大会優勝を目指していく。オーディション番組「Gleeプロジェクト ～主役は君だ!」の優勝者が新メンバーとして加入。